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显微镜下制作细胞吹打更容易成功的技巧
2016-04-21
方法一:
1.用力不能太猛,要均匀吹打;
2.按顺序从上到下,从右到左,每个地方都吹到。
3.尽量不要吹起泡沫,有少量问题也不大。
4.吹打的次数有时候与胰酶有关系。我们一般是冷胰酶消化0.5-1min(A549,2BS,HepG2都试过了),15-20次也够了。过度吹打会损害细胞,会影响培养基的pH值...,但是,如果不充分吹打,消化后细胞还是有好多贴在壁上。在75ml培养瓶的不同部分吹打,总共15次,然后在解剖显微镜下观察,细胞99%吹打下来了,状态也不错。

方法二:
用预热胰酶加入1ml,然后倒掉0.5ml左右,再等待2min左右就可以了,大约吹打15次就OK
其实帖壁生长细胞消化传代并不是借助吹打的力量才使细胞离壁,关键是消化。
消化要到位,然后弃掉胰酶,加培养基,摇晃培养瓶,使细胞借助培养液打击的力量脱落。
然后用枪吹几次培养液,把仍没有成单个的细胞吹成单个。
我觉得这样对细胞损伤很小。

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